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普通PCR儀和熒光定量PCR儀的操作規程

聚合酶鏈式反應,簡稱PCR。聚合酶鏈式反應,其英文Polymerase Chain Reaction(PCR)是體外酶促合成特異DNA片段的一種方法,通過高溫變性、低溫退火及適溫延伸等幾步反應形成一個周期,目的DNA迅速擴增,其具有節約時間,操作簡單,高靈敏度,強特異性等特點。其又被叫做無細胞分子克隆或特異性DNA序列體外引物定向酶促擴增技術。其不但在核酸序列分析和基因分離、克隆被使用,其還在任何有DNA,RNA的地方被使用或者被用來對疾病進行診斷。


普通PCR儀操作規程

開機操作

(1)將PCR儀電源開關打開。

(2)將PCR儀頂蓋向后平推,然后將PCR薄壁管放進去。

(3)將PCR儀頂蓋向前平推,并且均勻用力壓下反扣部分。

值得注意的是:9700PCR儀必須使用圓頭的PCR薄壁管。


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關機操作

(1)實驗結束后,點擊EXit到主界面出現,將PCR電源開關關閉。

(2)均勻用力抬起反扣部分,將PCR儀頂蓋向后平推,將PCR薄壁管取出。

(3)將PCR儀頂蓋向前平推。


熒光定量PCR儀操作規程

1.開始運行儀器

PCR儀底座開關打開,再將定量PCR儀檢測器開關打開。在實驗之前,首先對系統預熱半個小時,打開電腦,將iQ5軟件啟動。


2.放置樣品

在0.2ml的薄壁管或96孔板內加入PCR反應體系,將管蓋蓋上,注意,不要讓手指和反應管表面有接觸,所以必須將一次性塑料手套戴上。按照順序在儀器的加熱孔中放入反應管。


3.設置程序,運行試驗

定量PCR軟件的基本操作步驟如下:

(1)對熱循環程序文件進行設置。

(2)對反應管文件進行設置。

(3)點擊“run”鍵,將程序運行。

(4)數據分析


4.結果分析

(1)PCR反應結束后,標準曲線和Ct值軟件會自動計算。

(2)可以在軟件窗口選擇相應的分析功能進行表達量分析,等位基因分析。

(3)點擊右上方的“Report”鍵,還能夠將結果報告單輸出。


5.關閉運行儀器

實驗結束后將iQ5軟件、熒光定量檢測器及擴增系統電源關閉,將電腦關閉,將反應管取出。


2019-06-18 17:46:31 瀏覽次數:134次

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