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PCR儀的控溫方法及應用

聚合酶鏈式反應,簡稱PCR。聚合酶鏈式反應,其英文Polymerase Chain Reaction(PCR)是體外酶促合成特異DNA片段的一種方法,通過高溫變性、低溫退火及適溫延伸等幾步反應形成一個周期,目的DNA迅速擴增,其具有節約時間,操作簡單,高靈敏度,強特異性等特點。其又被叫做無細胞分子克隆或特異性DNA序列體外引物定向酶促擴增技術。其不但在核酸序列分析和基因分離、克隆被使用,其還在任何有DNA,RNA的地方被使用或者被用來對疾病進行診斷。


PCR的三種控溫方法

1.計算控制

在運行多數程序中,最好的溫度控制方法就是計算控制,溫度的一致性以及可靠性都比較的好。使用計算控制的時候,模塊的溫度通過對樣品的管子或玻片熱傳導的速度和樣品的體積進行估算(當程序運行的時候,會顯示這些樣品的信息)。由于這種估算遵循已知的容量和熱力學的規律,因此和模塊控制以及探針控制相比,計算控制更精準。運行計算控制能夠使得實驗時間縮短,簡單的程序操作能夠使得酶的活性得到保護,使得引物的損失減少。


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2.模塊控制

和計算控制相比,模塊控制的精確度要更加低些。在模塊控制下,樣品溫度達到設置溫度的時間一般在模塊之后。之所以會有這段延遲,是樣品體積和管子類型的緣故。


3.探針控制

探針控制一般能夠在不同的環境中使用,然而其需要被小心的使用。微信版和玻片就可以。


應用:

1.血液檢驗漏檢率

由于實時熒光定量PCR方法比Elisa靈敏很多,因此,血站或血液研究所一般用來研究Elisa方法的漏檢率,即分析Elisa方法測定為陰性的血樣,再用實時熒光定量PCR方法來復檢。復檢時,一般24個Elisa陰性的血樣混合成一個樣本進行檢測。


2.新診斷及檢驗試劑的開發

現有的很多診斷及檢驗方法都不能同時滿足快速、靈敏、定量的要求如現有培養法、Elisa法等等,而熒光定量PCR方法以則可以做到這一點,從而可為臨床疾病、商檢、糧油檢驗、食品檢驗、血液檢驗等等開發新的試劑,從而提高檢驗的靈敏度、速度及準確性等;這類試劑的種類是非常多的,所開發的試劑的社會效益及經濟效益都是很巨大的。


3.新藥開發研究,人用藥物及其他藥物

針對一些感染性疾病的藥物,如各種病毒病、細菌病等,在新藥的開發過程中,快速了解藥物對疾病進程的影響可以為新藥開發節約大量的人力、時間和資金,與以前所用的Elisa等方法相比,實時熒光定量PCR技術可以快速、準確、定量、靈敏地測定血液或組織中病原體的含量,因此有利用分析藥物的作用效果,為比較不同的配方的療效、用藥量、用藥時間等等提供快速、定量的評價。


2019-06-18 17:58:46 瀏覽次數:134次
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